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    公司新聞行業(yè)動態(tài)
    銘成講堂丨揭秘PCR實驗室的“智慧基因”
    時間:2024-12-03 23

         PCR實驗室,又名基因擴增實驗室,是進行聚合酶鏈反應的實驗室場所。PCR是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。它可以用于疾病的診斷和任何有DNA,RNA的地方,又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。

          PCR實驗室廣泛應用于生物學各個領域。如法醫(yī)物證、艾滋病、癌基因的檢測和診斷、動植物檢疫、化妝品、食品衛(wèi)生檢測、轉基因作物與轉基因微生物檢測等。

    一、實驗室的設計規(guī)范依據(jù)

    1、《醫(yī)學檢驗所基本標準(試行)》

    2、《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》

    3、《實驗室生物安全通用要求》

    4、《生物安全實驗室建筑技術規(guī)范》

    5、《人間傳染的病原微生物名錄》等


    二、實驗室的平面規(guī)劃設計

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    1. 設計原則

          各區(qū)獨立、注意方向、因地制宜、方便工作。

    2. 平面區(qū)分

          實驗室主要包含:試劑準備區(qū) 、標本制備區(qū) 、擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)。

         各區(qū)在物理空間上必須是完全相互獨立的,各區(qū)域無論是在空間上還是在使用中,應當始終處于完全的分隔狀態(tài),不能有空氣的直接相通。不論是組合式還是分散式布置的PCR實驗室,各功能房間均宜設置獨立緩沖間。

         為避免PCR產(chǎn)物污染,PCR實驗室空氣流向必須嚴格遵循單一方向進行,即從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)。

    2.1 分區(qū)的工作內(nèi)容

    2.1.1.試劑準備區(qū)

    主要完成試劑配制、分裝、儲存的工作。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。本區(qū)域的氣壓應相對外界保持正壓。

    2.1.2.標本制備區(qū)

    本區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。樣本應通過傳遞窗直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。

    對于氣流壓力的控制,由于在本區(qū)內(nèi)加樣操作可能產(chǎn)生氣溶膠,為避免氣溶膠擴散出去對外界造成污染,本區(qū)應對外界保持負壓。從質量控制的角度而言,本區(qū)相對于擴增反應混合物配制和擴增區(qū)以及擴增產(chǎn)物分析區(qū)為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。但當涉病原微生物時,根據(jù)《實驗室生物安全通用安全》對BSL-2實驗室的各項安全要求,此時要本區(qū)相對于擴增區(qū)為負壓,故涉及病原微生物操作時 ,  在綜合考慮質量控制、生物安全因素的前提下,整體上標本制備區(qū)與擴增區(qū)的壓力應持平。即均為負壓,兩個相鄰房間之間的負壓值基本相當。

    2.1.3.擴增區(qū)

    本區(qū)功能是DNA擴增和擴增片段的測定。已制備的DNA模板  (來自標本制備區(qū)) 及反應混合液  (來自試劑貯存和制備區(qū))  制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。  

    對于氣流壓力的控制,相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行。

    2.1.4.產(chǎn)物分析區(qū)

    本區(qū)是擴增產(chǎn)物的分析??赡軙玫侥承┛芍禄蛲蛔兊挠卸疚镔|,應特別注意實驗人員的安全防護。對于氣流壓力的控制,該區(qū)域是PCR實驗的最后一步,壓力應為最低,相對于鄰近區(qū)域為負負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。

    2.2.分區(qū)設置要求

    2.2.1. PCR實驗室原則上分為四個工作區(qū)域, 各工作區(qū)域應設緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,不能直通,需安裝傳遞窗傳送標本等物品。

    2.2.2.實驗材料等,只能從試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)輸送到產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動。

    2.2.3.試劑準備區(qū) 、擴增區(qū) 、擴增產(chǎn)物分析區(qū),空間可以相對小一些;樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應大一些。

    2.2.4.PCR實驗室區(qū)域的設置并不是一成不變的 ,  以下幾種情況需要說明:

    (1)若樣本在擴增之前需要粉碎處理 ,  則需要增加一個區(qū)域用于樣品的粉碎;

    (2)若采用實時熒光PCR法,則擴增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個區(qū);

    (3)若采用全自動化PCR分析儀,則標本制備區(qū)、擴增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個區(qū)。

    試劑準備區(qū)(1).jpg

    樣品制備室.jpg

    PCR排風控制(1).jpg

    三、實驗室的空間細部規(guī)劃設計

    樣品制備室2.jpg

    1.面積:實驗室各個房間的面積并沒有嚴格要求,通常每間面積為10~20㎡。試劑區(qū)一般為10-15㎡,樣本制備間25-30㎡,擴增室一般為10-15㎡,產(chǎn)物擴增室15-20㎡。

    2.室內(nèi)凈高:走道凈高不應低于2.2m,設置空氣調節(jié)時,不應低于2.4m,一般為2.4m—2.6m;當不設置空氣調節(jié)時,建議不宜低于2.7m,一般為2.7m—2.9m

    3.門、窗:門凈寬度應為0.8—0.9m,高度不應小于2.10m;由一個及以上標準單元組成的實驗室的門洞寬度不應小于1.2m,高度不應小于2.1m;有特殊要求的房間的門洞尺寸應按具體情況確定;實驗室的門扇應設觀察窗。外窗應具有良好的密閉性及隔熱性,窗戶的面積需根據(jù)房間的尺寸來確定。首層、半地下室及地下室的外窗應采取防蟲及防嚙齒動物的措施。

    4.PCR走廊:單面布房最小凈寬不應小于1.3m,單走道雙面布房最小凈寬不應小于1.6m,走廊地面有高差時,當高差不足二級踏步時,不得設置臺階,應設坡道,其坡度不宜大于1:8。

    5.緩沖間:進深及進深尺寸宜≥1300mm,且不大于實驗室面積的1/8。

    6.設備間距:靠兩側墻布置的邊實驗臺之間的凈距不應小于1.5m,當靠一側墻改為布置排毒拒或實驗儀器設備時,其與另一側實驗臺之間的凈距不應小于1.8m,由一個標準單元組成的常規(guī)實驗室??績蓚葔Σ贾玫倪厡嶒炁_與房間中間布置的島式或半島式中央實驗臺之間的凈距不應小于1.5m。布置排毒拒或實驗儀器設備時,其與實驗臺之間的凈距不應小于1.8m,實驗臺的端部與走道墻之間的凈距不宜小于1.2m。


     四、實驗室的安全事項

    1、實驗室應該具有防止昆蟲和其他動物進入的措施。

    2、實驗室門口位置設置緊急洗眼器和緊急噴淋,以防止實驗人員受到傷害。

    3、實驗室內(nèi)的通訊設施應該放置于生物安全柜對面,與室外聯(lián)系的電話應放置在醒目位置,并且放置在便于實驗室人員快速拿起的位置;實驗室內(nèi)的壓力顯示器和報警裝置都應放置在醒目位置。

    4、生物安全柜的擺放位置不宜擺放在與出入口緊鄰的墻體上。

    5、一個臨床基因擴增PCR實驗室保持兩個方向相反的安全出口。


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